PPE检测采用NS945

猪胰腺弹性酶活性的测定 

su - ala - ala - ala - pna测定(EPC编号. NS945)作为底物(44).

所需的材料

1. Tris buffer; 0.1 M Tris pH 8.3在25ºC.  溶解6.75 g Tris-HCl和8.14g Tris碱900 ml H₂O.  在25℃下测定pH值.  必要时滴定至pH 8.3配0.1 M HCl或0.1m NaOH.  用H稀释至1000ml₂O.
    
2. NaOAc-NaCl buffer; 0.05 M NaOAc pH 5，含0.1 M NaCl.  结合14.8毫升0.2 M HAc和35.2ml 0.2 M NaOAc和100 ml 0.2 M NaCl. 用H调至200毫升₂O.  在25℃下滴定至pH 5.
    
3. Substrate solution; 2.5 mM in 0.1 M Tris pH 8.3.  使用25 mg小瓶n - su - ala - ala - ala - pna (EPC No NS945), 用22ml tris缓冲液溶解内容物.  (注:用约10ml缓冲液冲洗底物瓶5次.)搅拌溶解.  储存于5ºC.
    
4. Elastase solution; dissolve 1.在NaOAc-NaCl缓冲液中添加0 mg / ml.  准备二次溶液，浓度为0.在相同的缓冲液中每毫升添加10毫克.  在冰浴中保持两种溶液的低温.
    

过程

1. 将分光光度计调至410 nm，细胞温度调至25ºC.
    
2. 平衡2.5 ml Tris缓冲液和0.5 ml底物溶液在细胞中加热至25º.
    
3. 添加0.0.05 ml的0.10 mg ml弹性酶溶液，混合，每隔1分钟测定吸光度的增加速度.  加息幅度应该是可以的. 0.025 – 0.040 ∆₄₁₀ 毫微米/分钟.

比活度计算

Î, 1%, 280 = 19.5为猪胰腺弹性酶

mg/ml = A₂₈₀ x 0.51

Vol = 3.A=410 nm T=25ºC光路=1.0 cm

8.8= pNA在410 nm处的消光系数 

单位  =  ∆A₄₁₀ x 3.005 ml
mg         8.8 x 0.0005 mg